전혈 급속한 항원 탐지 장비, 150-250ul 항원 가정 시험 장비

IVD 의료 기기로 SARS-CoV-2 중화 항체 신속 테스트 키트 수행

중화항체 형광검사키트 & 중화항체 신속검사

슈도바이러스 중화 항체 분석은 이전에 설명한 대로 수행되었습니다(5).간단히 말해서, Vero 세포를 96웰 플레이트에 시딩하여 감염 시 단층을 생성했습니다.적정량의 rVSV-SARS-Cov-2[phCMV3-SARS-CoV-2 스파이크 SARS-CoV-2-pseduotyped VSV-ΔG-GFP(녹색 형광 단백질)는 HEK293T 세포, ATCC CRL-3216을 형질감염시켜 생성됨]를 인큐베이션했습니다. 96웰 플레이트의 컨플루언트 Vero 세포 단층(ATCC CCL-81)에 첨가하기 전에 37°C에서 1시간 동안 연속 희석된 인간 혈장으로.세포를 5% CO에서 37°C에서 12~16시간 동안 인큐베이션했습니다.2.그런 다음 세포를 4% 파라포름알데히드에 고정하고 1㎍/ml Hoechst로 염색하고 CellInsight CX5 이미저를 사용하여 이미지화하여 GFP를 발현하는 세포의 총 수를 정량화했습니다.감염은 정상 인간 혈장과 함께 인큐베이션된 rVSV-SARS-CoV-2로 감염된 세포의 평균 수로 정규화되었습니다.LOD는 일련의 노출되지 않은 대조군의 혈장 샘플을 기반으로 <1:20으로 설정되었습니다.부정적인 신호는 1:19로 설정되었습니다.중화 IC50 (중위 억제 농도) 역가는 GraphPad Prism 8.0에서 One-Site Fit LogIC50 회귀를 사용하여 계산되었습니다.

고처리량 형광 기반 중화 분석

COVID-19 혈청 진단 및 백신 평가의 격차를 채우기 위해 우리는 환자 표본의 항체에 의한 기자 SARS-CoV-2의 중화를 빠르고 안정적으로 측정하는 형광 기반 분석을 개발했습니다.이 분석은 mNG 유전자가 바이러스 게놈의 ORF7에서 조작된 안정한 mNeonGreen(mNG) SARS-CoV-2를 기반으로 구축되었습니다(그림 1a).1a)10.mNG SARS-CoV-2의 전체 시퀀스는 보충 그림 1에 설명되어 있습니다.1.수치1b96-웰 형식의 리포터 중화 분석의 순서도를 보여줍니다.분석 프로토콜은 보충 방법에 자세히 설명되어 있습니다.간단히 말해서, 환자 혈청을 연속적으로 희석하고 리포터 바이러스와 함께 인큐베이션했습니다.37°C에서 1시간 동안 인큐베이션한 후 Vero CC-81 세포(96웰 플레이트에 미리 시딩됨)를 0.5의 감염 다중도(MOI)에서 바이러스/혈청 혼합물로 감염시켰다.감염 후 16시간에 mNG 양성 세포를 고함량 영상 판독기를 사용하여 정량화했습니다(그림 1a).1b).Vero E6 세포가 아닌 Vero CC-81 세포가 형광 세포의 정확한 정량화를 가능하게 하기 위해 mNG 분석을 위해 선택되었다는 점에 유의해야 합니다.RT-PCR 확진 환자의 코로나19 혈청 검체 60개와 코로나19가 아닌 혈청 검체 60개(COVID-19 출현 전 보관)를 리포터 바이러스를 이용해 분석했다.일부 COVID-19-양성 표본의 경우, 바이러스 RT-PCR 양성 후 샘플 수집일이 가능했으며 표에 표시되어 있습니다.1 번 테이블.1.리포터 바이러스 감염 후, 세포는 혈청이 없을 때 녹색으로 변했습니다(그림 1b).1c, 하단 패널);대조적으로, COVID-19 환자 혈청과 리포터 바이러스의 배양은 형광 세포의 수를 감소시켰습니다(상단 패널).형광 세포의 수와 혈청 희석 배율 사이의 용량 반응 곡선이 얻어졌습니다(그림 1a).1d 및 보충 그림. 2), 50%의 형광 세포(NT50).리포터 분석은 24시간 이내에 120개의 검체를 신속하게 진단했습니다. 60개의 COVID-19 혈청(검체 1-60) 모두 NT 양성50 35에서 5711까지, 60개의 비-COVID-19 혈청(검체 61-120) 모두 NT 음성50 <20개 중 (표 1).

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